一、試驗簡介

本試驗規(guī)定了CO2吸收法和氮轉化法測定化學農(nóng)藥對土壤微生物毒性的材料、條件、操作、質量控制、數(shù)據(jù)處理、試驗報告等的基本要求。適用于為化學農(nóng)藥登記而進行的土壤微生物毒性試驗,其他類型的農(nóng)藥可參照使用。不適用于易揮發(fā)和難溶解的化學農(nóng)藥。

二、檢測標準

GB/T31270.16—2014化學農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則第16部分:土壤微生物毒性試驗

三、試驗概述

土壤微生物毒性試驗包括CO2吸收法和氮轉化法,根據(jù)農(nóng)藥登記管理法規(guī)及其他規(guī)定選擇相關方法進行試驗。

1、CO₂吸收法在標本瓶內(nèi)放置兩只小燒杯,其中一只盛放土壤,另一只盛放堿液(如NaOH溶液),用于吸收土壤微生物呼吸所釋放的CO₂。以模擬農(nóng)藥常用量、10倍常用量、100倍常用量時土壤表層10cm土壤中的農(nóng)藥含量設3種不同處理濃度,將標本瓶密閉并置于25°C±1°C、黑暗條件下培養(yǎng),并保持土壤含水量為最大田間持水量的40%~60%,于試驗開始后的第1天、第2天、第4天、第7天、第11天、第15天更換出密閉瓶中的堿液,測定吸收的CO₂量。評價供試物對土壤微生物活性的影響。

2、氮轉化法過篩的土壤與適量有機底物混合后用供試物處理,同時設置一組不加供試物的對照。試驗至少需設置2個測試濃度,可參考供試物田間最大施用量設置。將土壤置于黑暗、20°C±2°C的條件下培養(yǎng),并保持土壤含水量為最大田間持水量的40%~60%,在培養(yǎng)0d、7d、14d和28d后,從處理組和對照組中取出一定量的土壤樣品,用合適的溶劑浸提并測定提取液中硝酸鹽的含量。比較處理組與對照組的硝酸鹽形成率,計算處理組相對于對照組的百分比差異。試驗至少持續(xù)28d,如果第28天處理組與對照組的差異不小于25%,則試驗需延長,最長至100d。

四、試驗結果評定

農(nóng)藥對土壤微生物毒性的毒性等級劃分：

（1）CO₂吸收法 

CO₂吸收法中,農(nóng)藥對土壤微生物的毒性分成三個等級:土壤中農(nóng)藥加量為常量,在15d內(nèi)對土壤微生物呼吸強度抑制達50%則劃分為高毒;土壤中農(nóng)藥加量為常量10倍,能達到上述抑制水平的,劃分為中毒;土壤中農(nóng)藥加量為常量100倍,能達到上述抑制水平的,劃分為低毒;若三種處理均達不到上述抑制水平,則同樣劃分為低毒。

（2）氮轉化法

在試驗28d后的任何時間所取樣品,若測定其低濃度處理組和對照組的硝酸鹽形成速率的差異不大于25%,則可認為該農(nóng)藥對土壤中的氮轉化沒有長期影響。

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