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植物TALENs基因編輯

瀏覽次數(shù):848|來(lái)源:飛凡檢測(cè) | 2022-03-10 09:06:10

類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)是一種多功能的基因組編輯工具,已在植物基因功能研究和育種中得到了廣泛的應(yīng)用。與鋅指核酸酶(zinc finger nucleases,ZFNs)相比,該技術(shù)具有脫靶率低和細(xì)胞毒性低的優(yōu)點(diǎn),TALENs采用簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)- DNA識(shí)別機(jī)制。蘇州飛凡標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司擁有豐富的植物基因編輯經(jīng)驗(yàn)。

TALENs由DNA結(jié)合域和具限制性內(nèi)切酶活性的FokI組成(圖1)。DNA結(jié)合域通常由1.5-33.5個(gè)串聯(lián)重復(fù)序列組成。每個(gè)重復(fù)序列包含34個(gè)氨基酸,其中第12和第13個(gè)氨基酸為可變的,稱為“重復(fù)可變雙殘基”(repeat variable diresidues,RVDs),它們可特異性地識(shí)別一個(gè)核苷酸。簡(jiǎn)而言之,RVDs的解碼機(jī)制是NI (Asn Ile)、HD (His Asp)、NN (Asn Asn)和NG (Asn Gly)可分別識(shí)別A、C、G、T(圖1)。由FokI組成的DNA切割域通常以二聚體的形式行使功能,且可切割序列從而造成DNA雙鏈斷裂。斷裂的DNA雙鏈一般通過(guò)非同源末端連接或同源重組修復(fù)兩種方式進(jìn)行修復(fù),修復(fù)過(guò)程中會(huì)在斷裂位點(diǎn)產(chǎn)生不同形式的突變:如點(diǎn)突變、缺失、插入、倒置、復(fù)制和易位等。

類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶的結(jié)構(gòu) 

圖 1. 類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶的結(jié)構(gòu)(Wei et al., 2013)。

蘇州飛凡可提供多種技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)TALE蛋白的定制合成,如限制性酶切連接法(restriction enzyme and ligation,REAL)、基于PCR的gold gate法(GG-PCR)、基于質(zhì)粒載體的GG法(GG-Vector)、高通量TALE合成技術(shù)(fast ligation-based automatable solid-phase high-throughput,F(xiàn)LASH)、迭代加帽組裝法(iterative capped assembly,ICA)、基于長(zhǎng)粘末端的LIC(ligation-independent cloning)組裝法和單元組裝法(unit assembly,UA)等。我們還可以提供修飾的FokI,從而可以使它形成異源二聚體,提高剪切特異性。我們可以提供多種植物的遺傳轉(zhuǎn)化,如擬南芥、水稻、小麥、苜蓿、玉米、煙草和棉花等,可以滿足客戶的不同需求。

實(shí)驗(yàn)流程

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