重組蛋白原核表達(dá)服務(wù)

飛凡一直致力于重組蛋白表達(dá)與制備研究。我們的科學(xué)家擁有豐富的原核蛋白表達(dá)以及工業(yè)級別蛋白發(fā)酵、純化經(jīng)驗(yàn)。通過每年多達(dá)400個原核蛋白制備項目的技術(shù)積累，我們設(shè)計了一套有效的包含多種融合標(biāo)簽（His，GST，SUMO，F(xiàn)LAG等標(biāo)簽）的表達(dá)載體，能夠?yàn)榭蛻艨扇苄员磉_(dá)超過150kDa分子量的重組蛋白；同時我們收集與建立了多種表達(dá)菌株（包括低溫誘導(dǎo)表達(dá)菌株，10-16℃超低溫誘導(dǎo)表達(dá)蛋白），以保證每一個重組蛋白制備的品質(zhì)，為客戶提供優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。

大腸桿菌（E.coli）重組蛋白表達(dá)技術(shù)經(jīng)過多年的發(fā)展，已經(jīng)變得日趨成熟。但想要在大腸桿菌表達(dá)體系獲得較高水平的可溶性以及高產(chǎn)量的蛋白表達(dá)，尤其是針對大分子蛋白和某些藥物類蛋白，一個優(yōu)質(zhì)的表達(dá)策略必不可少?？蛻糁恍枰峁┪覀円欢蔚鞍仔蛄?，CDS或蛋白名稱，我們富有經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)家均可以為您在較短的時間內(nèi)制定一個完整的蛋白表達(dá)和純化方案。常見的小分子（分子量<10 kDa）蛋白類藥物，如Leptin，利拉魯肽，EGF等在原核表達(dá)過程中以親和標(biāo)簽+融合蛋白形式進(jìn)行表達(dá)，發(fā)酵和純化。此類蛋白的難點(diǎn)在于蛋白均以包涵體的形式進(jìn)行表達(dá)，后期需要進(jìn)行工藝繁瑣的蛋白變復(fù)性處理。

重組蛋白的高效率表達(dá)，通常會涉及以下幾個方面：

宿主體系選擇

蛋白需求不同，那么表達(dá)宿主體系也不盡相同。原核表達(dá)體系常用的宿主為大腸桿菌和枯草桿菌，前者表達(dá)量高，后期產(chǎn)品需要去除內(nèi)毒素；后者蛋白產(chǎn)量相對較低，但不產(chǎn)生內(nèi)毒素。重組蛋白大腸桿菌表達(dá)常采用BL21（DE3）和K-12衍生菌株作為表達(dá)宿主與枯草桿菌作為表達(dá)菌株的主要區(qū)別如下所示：

表達(dá)質(zhì)粒體系選擇

目前常用的重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒載體融合了復(fù)制子(Replicon)、啟動子(promoter)、篩選標(biāo)簽(selection marker)、多克隆位點(diǎn)（MCS）和融合蛋白移除策略(fusion tag removal strategy)，如圖所示：

飛凡的科學(xué)家通過改造pET載體，獲得雙表達(dá)質(zhì)粒（BiPlasmid vector），該質(zhì)粒含有雙MCS位點(diǎn)，雙T7啟動子，雙lac操縱子和雙核糖體結(jié)合位點(diǎn)，利用該質(zhì)粒我們可以為客戶進(jìn)行一次轉(zhuǎn)染操作，而獲得兩種蛋白的獨(dú)立表達(dá)。同時我們構(gòu)建了含有低溫誘導(dǎo)蛋白表達(dá)元件的pCold系列載體，該載體能夠在16℃條件下經(jīng)過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)大分子量蛋白，如上清表達(dá)150kDa活性蛋白。

融合標(biāo)簽選擇

親和標(biāo)簽：蛋白重組表達(dá)過程中采用親和標(biāo)簽融合表達(dá)有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進(jìn)某些不溶性蛋白可溶。蛋白標(biāo)簽可分兩類：一類是短肽類標(biāo)簽；一類是長肽以融合蛋白（fused partner）形式共表達(dá)。使用不同的蛋白標(biāo)簽需要根據(jù)具體案例來分析，卡梅德生物總結(jié)了常用的一些蛋白標(biāo)簽性質(zhì)，如表1所示。

蛋白重組表達(dá)策略組合

重組蛋白的表達(dá)往往不像理論那樣一帆風(fēng)順，在實(shí)際的表達(dá)過程中有可能產(chǎn)生各種各樣的問題。在選擇一個蛋白表達(dá)策略困難的情況下，那么采用看似笨拙的方法，有可能會成為一種意想不到的“成功捷徑”，比如項目要求構(gòu)建表達(dá)兩種重組蛋白時，構(gòu)建6種不同的表達(dá)質(zhì)粒，意味著有36種不同的表達(dá)條件組合，通過高通量微量蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)一次性就可獲得蛋白表達(dá)條件組合，后續(xù)中式飛行試驗(yàn)和成本控制會變得相對容易。

蛋白原核重組表達(dá)服務(wù)具體流程

飛凡檢測質(zhì)檢報告流程：

1、 提供產(chǎn)品資料

2、 工程師根據(jù)您的產(chǎn)品推薦合適檢測項目，并給出報價

3、 確認(rèn)報價沒有問題，然后把樣品送到我們實(shí)驗(yàn)室

4、 支付檢測費(fèi)用，安排檢測

5、檢測完成，出具檢測報告，郵寄給客戶

咨詢熱線：18018131362

關(guān)于飛凡

飛凡檢測致力于打造國內(nèi)專業(yè)的第三方檢測服務(wù)公司，不斷優(yōu)化整合市場檢測資源，飛凡檢測與多家科研院所，如上海同濟(jì)大學(xué)，蘇州大學(xué)，SGS，TUV，以及國內(nèi)眾多知名的檢測公司進(jìn)行深度合作，共同為國內(nèi)制造業(yè)服務(wù)，為中國的制造業(yè)開拓海外市場保駕護(hù)航，為我們?nèi)粘Ｉ畹慕】蛋踩珮淞?biāo)桿；公司目前工程師百余人，95%以上是本科以上學(xué)歷；我們合作的實(shí)驗(yàn)室通過CNAS，CMA（EZ），所出具的任何一張報告都有CNAS，CMA資質(zhì)，確保出具的每份報告都具有權(quán)威的法律效力。

為什么選擇我們

市場需求和成熟的模式給了我們成功的保證

相關(guān)文章