???        一、綜述

???        隨著工業(yè)的發(fā)展,環(huán)境污染問題越來越嚴(yán)重.環(huán)境中有毒物質(zhì)的毒性評(píng)價(jià)和監(jiān)測(cè)工作越來越受到大家的重視.目前我國(guó)在這方面主要采用理化監(jiān)測(cè)方法,根據(jù)理化指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),計(jì)算污染物的等標(biāo)污染負(fù)荷, 進(jìn)行總量控制。但是,理化方法所反映的只是環(huán)境中某一種污染物的濃度水平及貢獻(xiàn)量,并不能反映出各種污染物的綜合毒性大小.生物監(jiān)測(cè)則能彌補(bǔ)理化監(jiān)測(cè)在此方面的不足.傳統(tǒng)的生物毒性監(jiān)測(cè)以水蚤、藻類或魚等為受試對(duì)象,雖然能反映毒物對(duì)生物的直接影響,但是應(yīng)用這些方法的最大缺點(diǎn)是試驗(yàn)周期長(zhǎng),操作繁瑣,需要較多的儀器設(shè)備, 結(jié)果不穩(wěn)定, 重復(fù)性差。而發(fā)光細(xì)菌法測(cè)定是一種簡(jiǎn)便快速的生物毒性檢測(cè)方法,它不僅能測(cè)試?yán)砘ㄋ軠y(cè)定的單因子指標(biāo),尤其能快速準(zhǔn)確的測(cè)試出環(huán)境的綜合毒性指標(biāo),具有理化法和傳統(tǒng)生物監(jiān)測(cè)法無可比擬特點(diǎn)。
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???        二、方法提要

???        基于發(fā)光細(xì)菌相對(duì)發(fā)光度與水樣毒性組分總濃度呈顯著負(fù)相關(guān)伊< 0．05），因而可通過生物發(fā)光光度計(jì)測(cè)定水樣的相對(duì)發(fā)光度，以此表示其急性毒性水平。

???水質(zhì)急性毒性水平按8所述條件選用相當(dāng)?shù)膮⒈榷疚锫然瘽舛龋ㄒ詍g/L為單位）來表征，或選用ECSO值（半數(shù)有效濃度一一以樣品液百分濃度為單位）來表征。
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???        三、發(fā)光細(xì)菌法簡(jiǎn)介

???        3.1 發(fā)光細(xì)菌法的原理

???        發(fā)光細(xì)菌是一類非致病的革蘭氏陰性兼性厭氧細(xì)菌, 最適溫度20～ 30℃, pH6～ 9,N aCl 濃度3% , 在正常的生理?xiàng)l件下能夠發(fā)射可見熒光的細(xì)菌, 這種可見熒光波長(zhǎng)在450～490nm 之間, 在黑暗處肉眼可見. 發(fā)光細(xì)菌法是利用靈敏的光電測(cè)量系統(tǒng)測(cè)定毒物對(duì)發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度的影響。毒物的毒性可以用EC50表示, 即發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度降低50%時(shí)毒物的濃度。發(fā)光細(xì)菌含有熒光素、熒光酶、ATP 等發(fā)光要素,在有氧條件下通過細(xì)胞內(nèi)生化反應(yīng)而產(chǎn)生微弱熒光。當(dāng)細(xì)胞活性升高, 處于積極分裂狀態(tài)時(shí),其ATP含量高, 發(fā)光強(qiáng)度增強(qiáng)。發(fā)光細(xì)菌在毒物作用下, 細(xì)胞活性下降,ATP含量水平下降, 導(dǎo)致發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度的降低。實(shí)驗(yàn)顯示, 毒物濃度與菌體發(fā)光強(qiáng)度呈線性負(fù)相關(guān)關(guān)系, 因而, 可以根據(jù)發(fā)光細(xì)菌發(fā)光強(qiáng)度判斷毒物毒性大小, 用發(fā)光度表征毒物所在環(huán)境的急性毒性.這種方法是20世紀(jì)70年代后期提出的一種微生物監(jiān)測(cè)新方法, 因其靈敏、快速、簡(jiǎn)便、費(fèi)用低廉則獨(dú)具特色.
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???        3.2  發(fā)光細(xì)菌法測(cè)定方法

???        (1)  新鮮發(fā)光細(xì)菌培養(yǎng)物測(cè)定法

???        將發(fā)光細(xì)菌接種于液體發(fā)光培養(yǎng)基中, 在適當(dāng)條件下(約20℃) 通氣培養(yǎng)12小時(shí)(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期),用緩沖液稀釋至適當(dāng)?shù)木鷿舛群蠹尤霚y(cè)試管中與試液混合10-20分鐘,讀出樣品管和對(duì)照管的光強(qiáng)度.

???        (2)  發(fā)光細(xì)菌和藻類混合測(cè)定法

???        有些有毒物對(duì)發(fā)光細(xì)菌無直接的毒害作用,而對(duì)藻類有毒害作用,利用這一特性,把培養(yǎng)好的發(fā)光菌懸液和藻類懸液混合后加入測(cè)試管中與試液混合,經(jīng)光照一段時(shí)間后測(cè)定發(fā)光菌的光強(qiáng)度變化.由于毒物對(duì)藻類的毒害而干擾藻類的光合作用,使之放氧能力下降,發(fā)光菌因缺氧其放光能力也隨機(jī)下降,因此可以根據(jù)光合作用放氧多少而導(dǎo)致發(fā)光菌發(fā)光強(qiáng)度的變化來推算出毒物毒性的大小.

???        (3)  發(fā)光細(xì)菌冷凍干燥制劑測(cè)定法

???將培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的發(fā)光細(xì)菌采用特殊方法制成干燥粉劑保藏于冰箱中, 使用時(shí)取出加入緩沖液保溫平衡5-10分鐘,使其恢復(fù)到原來的生理狀態(tài)和發(fā)光水平,然后用于測(cè)試.其特點(diǎn)是每次使用的發(fā)光菌具有相同的生理狀態(tài),對(duì)毒物靈敏性一致,易于定量測(cè)定,結(jié)果重復(fù)性,可比性好,操作簡(jiǎn)便,可長(zhǎng)期保藏,這將是該技術(shù)發(fā)展的方向.

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???        四、報(bào)告內(nèi)容

???        4.1實(shí)驗(yàn)室室溫

???        4.2采樣地點(diǎn)、日期、時(shí)間

???        4.3氯化汞濃度或樣品稀釋百分濃度與相對(duì)發(fā)光度的相關(guān)方程

???        4.4 樣品EC50值

???        4.5 測(cè)定人及所在單位

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