CHO-GS重組蛋白表達(dá)服務(wù)

 飛凡一直致力于重組蛋白表達(dá)與抗體制備研究。我們的科學(xué)家擁有豐富的哺乳動物蛋白重組表達(dá)、發(fā)酵和純化經(jīng)驗，能夠快速為不同客戶制定定制化的蛋白哺乳細(xì)胞表達(dá)方案。

我們的哺乳動物重組蛋白表達(dá)可依托中國倉鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovarian Cells ，CHO)，CHO細(xì)胞目前主要用于研究的有三種，分別是DUXB11 , DG44 , CHO-K1 。其中DUXB11與DG44屬于DHFR缺陷型， CHOK1為野生型。 CHO-S 為CHO-K1馴化后的懸浮細(xì)胞。使用 CHO 細(xì)胞進(jìn)行蛋白表達(dá)時，最常使用兩種基因選擇系統(tǒng)：DHFR/MTX 和 GS/MSX。在飛凡提供的蛋白表達(dá)哺乳動物系統(tǒng)中，CHO 細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)參與了超過 70% 的重組生物制藥蛋白質(zhì)的研究。 CHO-GS 細(xì)胞系是世界范圍內(nèi)用于治療性抗體蛋白表達(dá)的流行的表達(dá)系統(tǒng)。

飛凡檢測實驗室提供的基于CHO 細(xì)胞重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)主要使用無血清 CHO 培養(yǎng)基。 

CHO-K1細(xì)胞系：

親代 CHO 細(xì)胞系的亞克隆，來自成年中國倉鼠的卵巢。由于缺乏脯氨酸合成基因，細(xì)胞需要脯氨酸，生物合成鏈中的障礙在于將谷氨酸轉(zhuǎn)化為谷氨酰胺γ絲醛的步驟。它們會因霍亂毒素而發(fā)生形態(tài)變化。

應(yīng)用：營養(yǎng)和基因表達(dá)研究倉鼠的 CHO-K1 細(xì)胞系已用于通過慶大霉素保護(hù)試驗研究質(zhì)粒 pCM01 誘導(dǎo)對細(xì)菌與 CHO-K1 細(xì)胞結(jié)合的影響。它還可以在有或沒有乳酸的情況下培養(yǎng)，以測量細(xì)胞增殖的時間序列。

CHO表達(dá)的優(yōu)勢：

--CHO 細(xì)胞在復(fù)雜蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)折疊方面表現(xiàn)出色，具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾功能，表達(dá)的蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面最接近于天然蛋白分子

--CHO 細(xì)胞可以在無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中生長良好，消除了血清作為傳染源的潛在來源，提供了更高的安全性

--既可貼壁生長，又可以懸浮培養(yǎng)，且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力

--具有重組基因的高效擴(kuò)增和表達(dá)能力，外源蛋白的整合穩(wěn)定

--CHO 細(xì)胞的蛋白質(zhì)產(chǎn)量很高——通常可以達(dá)到2 – 6 g/L

--無血清培養(yǎng)基中的 CHO 細(xì)胞可輕松進(jìn)行下游加工

--CHO 細(xì)胞可以瞬時或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染以表達(dá)蛋白質(zhì)

--在單克隆抗體的情況下，中國倉鼠卵巢 (CHO) 和 NS0 (小鼠骨髓瘤) 細(xì)胞是最常用的細(xì)胞系

GS系統(tǒng)工作原理：

圖1顯示了 GS 酶如何催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺，從而使細(xì)胞能夠復(fù)制。

當(dāng) CHO 細(xì)胞中的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)有 GS 缺失時，研究人員用重組 DNA轉(zhuǎn)染CHO 細(xì)胞，該 DNA 由與 GS 基因密切相關(guān)的目的基因組成。甲硫氨酸亞砜胺 (MSX) 選擇系統(tǒng)用于選擇產(chǎn)生目標(biāo)蛋白質(zhì)的 CHO 細(xì)胞。 MSX 是一種類似于谷氨酸的藥物，可與 GS 結(jié)合，從而抑制谷氨酰胺的產(chǎn)生，而谷氨酰胺是細(xì)胞生長所必需的。在基因擴(kuò)增過程中，CHO 細(xì)胞在高水平的 MSX 中培養(yǎng)。選擇具有目標(biāo)基因的 GS 基因拷貝數(shù)增加的 CHO 細(xì)胞。GS 水平不足的 CHO 細(xì)胞會死亡。一旦選定，來自 CHO GS 陰性宿主的轉(zhuǎn)染細(xì)胞系不需要培養(yǎng)基中的 MSX。

表達(dá)系統(tǒng)的選擇：

DHFR 系統(tǒng)用于 CHO 細(xì)胞，其中突變型 CHO dhfr細(xì)胞系用含有靶基因和dhfr的載體轉(zhuǎn)染標(biāo)記基因。選擇發(fā)生在不含次黃嘌呤、甘氨酸和胸苷的培養(yǎng)基中。同時，由于 MTX 能夠抑制 DHFR 酶，因此逐漸增加甲氨蝶呤 (MTX) 濃度以放大蛋白質(zhì)產(chǎn)物的表達(dá)。GS 系統(tǒng)已用于 NS0 和 CHO細(xì)胞系，其中細(xì)胞用除 GS 基因外還含有目的基因的載體轉(zhuǎn)染。擁有GS基因的細(xì)胞可以合成自己的細(xì)胞內(nèi)谷氨酰胺；因此，這些細(xì)胞可以在添加谷氨酸和天冬酰胺提供的氨基團(tuán)的無谷氨酰胺培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

與 DHFR 系統(tǒng)相比，GS 選擇系統(tǒng)的一個優(yōu)點是細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生的氨較少，這會對重組蛋白的糖基化產(chǎn)生負(fù)面影響；此外，GS 系統(tǒng)通常提供較短的選擇周期，因為該系統(tǒng)需要較低的基因拷貝數(shù)來實現(xiàn)類似的擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平。

GS-CHO系統(tǒng)的表達(dá)載體：

客戶提供：

飛凡檢測質(zhì)檢報告流程：

1、 提供產(chǎn)品資料

2、 工程師根據(jù)您的產(chǎn)品推薦合適檢測項目，并給出報價

3、 確認(rèn)報價沒有問題，然后把樣品送到我們實驗室

4、 支付檢測費用，安排檢測

5、檢測完成，出具檢測報告，郵寄給客戶

咨詢熱線：18018131362

關(guān)于飛凡

飛凡檢測致力于打造國內(nèi)專業(yè)的第三方檢測服務(wù)公司，不斷優(yōu)化整合市場檢測資源，飛凡檢測與多家科研院所，如上海同濟(jì)大學(xué)，蘇州大學(xué)，SGS，TUV，以及國內(nèi)眾多知名的檢測公司進(jìn)行深度合作，共同為國內(nèi)制造業(yè)服務(wù)，為中國的制造業(yè)開拓海外市場保駕護(hù)航，為我們?nèi)粘Ｉ畹慕】蛋踩珮淞?biāo)桿；公司目前工程師百余人，95%以上是本科以上學(xué)歷；我們合作的實驗室通過CNAS，CMA（EZ），所出具的任何一張報告都有CNAS，CMA資質(zhì)，確保出具的每份報告都具有權(quán)威的法律效力。

為什么選擇我們

市場需求和成熟的模式給了我們成功的保證

相關(guān)文章