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Ames試驗

瀏覽次數(shù)：1019|來源：飛凡檢測 | 2019-09-05 03:31:31

Ames試驗

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??       三項遺傳毒性實驗——細(xì)菌回復(fù)突變試驗（Ames試驗）、微核試驗、染色體畸變

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??       基因毒性是指能直接或間接殺傷細(xì)胞DNA的性質(zhì)。如香煙煙霧中的苯并芘具有基因毒性（genotoxic）。這種物質(zhì)可致突變，可使原癌基因（proto-oncogenes）和腫瘤抑制基因（genes）發(fā)生改變。
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??網(wǎng)頁內(nèi)容顯示有限，如無您需要的項目，請電話咨詢公司相關(guān)人員     聯(lián)系方式： 400-805-0463

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??應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)
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??ISO 10993-3
??GB/T 16886.3 
??OCED471 
??OECD473 
??OECD474 
??OECD476
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??Ames實驗
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??中文名稱：鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗
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??       實驗?zāi)康暮驮希?/span>
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??       鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）的組氨酸營養(yǎng)缺陷型（his－）菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復(fù)突變的細(xì)胞外，一般只能分裂幾次，形成在顯微鏡下才能見到的微菌落。受誘變劑作用后，大量細(xì)胞發(fā)生回復(fù)突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見的菌落。某些化學(xué)物質(zhì)需經(jīng)代謝活化才有致變作用，在測試系統(tǒng)中加入哺乳動物微粒體酶，可彌補體外試驗缺乏代謝活化系統(tǒng)之不足。
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??哺乳動物細(xì)胞體外基因突變試驗
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??       實驗?zāi)康暮驮恚?/span>
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??       TK基因的產(chǎn)物胸苷激酶在體內(nèi)催化從脫氧胸苷（TdR）生成胸苷酸（TMP）的反應(yīng)。在正常情況下，此反應(yīng)并非生命所必需，原因是體內(nèi)的TMP主要來自于脫氧尿嘧啶核苷酸（dUMP），即由胸苷酸合成酶催化的dUMP甲基化反應(yīng)生成TMP。但如在細(xì)胞培養(yǎng)物中加入胸苷類似物（如三氟胸苷，即TFT——trifluorothymidine），則TFT在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸，進而摻入DNA，造成致死性突變，故細(xì)胞不能存活。若TK基因發(fā)生突變，導(dǎo)致胸苷激酶缺陷，則TFT不能磷酸化，亦不能摻入DNA，故細(xì)胞在含有TFT的培養(yǎng)基中能夠生長，即表現(xiàn)出對TFT的抗性。根據(jù)突變集落形成數(shù)，計算突變頻率，以判定受試物的致突變性。
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??哺乳動物細(xì)胞體外染色體畸變試驗
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??實驗?zāi)康暮驮恚?/span>
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??染色體畸變分為染色體結(jié)構(gòu)畸變和數(shù)目畸變，染色體結(jié)構(gòu)畸變又分為缺失、短片、互換等。
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??在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下，使培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞暴露于受試物中，用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙堿）處理，使細(xì)胞停止在中期分裂相，隨后收獲細(xì)胞，制片，染色，分析染色體畸變。
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??小鼠骨髓細(xì)胞微核實驗
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??實驗?zāi)康暮驮恚?/span>
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??微核是在細(xì)胞的有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細(xì)胞形成細(xì)胞核時，仍然留在細(xì)胞質(zhì)中的染色單體或染色體的無著絲粒片段或環(huán)。它在末期以后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)而形成，由于比核小得多，故稱微核。
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??Ames試驗

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??ICH推薦的標(biāo)準(zhǔn)遺傳毒性試驗組合

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??組合一

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??a.細(xì)菌回復(fù)突變試驗

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??b.體外染色體畸變試驗或體外微核試驗或體外小鼠淋巴瘤tk試驗，這三個試驗可以任選其中一個。

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??c.體內(nèi)微核試驗或體內(nèi)骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗；動物給藥后取外周血淋巴細(xì)胞做細(xì)胞遺傳學(xué)分析也可接受，但不常用。

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??組合二

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??a.細(xì)菌回復(fù)突變試驗

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??b.用兩種不同組織做體內(nèi)遺傳毒性評估，通常包含體內(nèi)微核試驗和另一個體內(nèi)試驗。第二個體內(nèi)試驗通常選擇評估動物肝臟DNA鏈斷裂。

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??細(xì)菌回復(fù)突變試驗是與致癌物檢測最相關(guān)的體外試驗。

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??細(xì)菌回復(fù)突變(Ames)試驗
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??用于檢測DNA損傷引起的基因突變。通過檢測受試物在測試菌株某些特殊構(gòu)建的突變體上引起突變的能力，即造成菌株從組氨酸/色氨酸依賴型向原養(yǎng)型突變，判斷受試物是否為致突變劑。

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??試驗需在加和不加s9代謝活化系統(tǒng)條件下同時進行。

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??※在培養(yǎng)細(xì)菌的瓊脂培養(yǎng)基中加入痕量的組氨酸或色氨酸，允許細(xì)菌前幾個小時生長，表現(xiàn)為背景菌苔。當(dāng)加入的組氨酸/色氨酸用盡后，只有發(fā)生了突變的細(xì)菌才可以繼續(xù)生長成為肉眼可見的回復(fù)突變菌落。

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??不同類型的Ames試驗

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